Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η ανάπτυξη και χρήση ανοσοενζυµικής
µεθόδου ELISA για την ακριβή ανίχνευση του είδους γάλακτος που χρησιµοποιείται για
την παρασκευή γαλακτοκοµικών προϊόντων. Για το σκοπό αυτό παράχθηκαν αντισώµατα
έναντι της αίγειας ανοσοσφαιρίνης IgG και έγινε έλεγχος του τίτλου αντισωµάτων µε
εφαρµογή έµµεσης ELISA. Τα αντισωµάτα αίγειας IgG παραλήφθησαν µετά από
καθαρισµό τους µε χρήση χρωµατογραφίας συγγένειας. Για την ανάπτυξη της
ανοσοενζυµικής µεθόδου χρησιµοποιήθηκαν τα παραπάνω αντισώµατα τα οποία
αποτέλεσαν το αντίσωµα δέσµευσης.
Η µέθοδος εφαρµόστηκε σε µίγµατα γνωστής πρόσµιξης αίγειου γάλακτος σε
πρόβειο (5-100%). Επίσης ερευνήθηκε η επίδραση της θερµικής επεξεργασίας στην
αποτελεσµατικότητα της µεθόδου. Παράλληλα πραγµατοποιήθηκε προσδιορισµός της
σύνθεσης των λιπαρών οξέων στα µίγµατα πρόβειου-αίγειου γάλακτος µε σκοπό την
ανίχνευση νοθείας µε βάση τη διαφοροποίηση του ποσοστού των λιπαρών οξέων, αλλά
και σε µίγµατα αγελαδινού-αίγειου και αγελαδινού-πρόβειου.
Από τα αποτελέσµατα της ανοσοενζυµικής µεθόδου προέκυψε ότι υπήρξε υψηλός
συντελεστής συσχέτισης (r=0.93) µεταξύ πραγµατικού και ανιχνεύσιµου ποσοστού
αίγειου γάλακτος. Η µέθοδος παρουσίασε υψηλή ακρίβεια µε συντελεστή διακύµανσης
3.96%. Η µέθοδος, µπορεί να εφαρµοστεί εξίσου αποτελεσµατικά και στους 65ºC για 5
min, ενώ η θερµική επεξεργασία των 90ºC για 5min επηρέασε την αποτελεσµατικότητα
της µεθόδου. H θέρµανση του γάλακτος στους 68ºC για 10 min προκάλεσε µείωση του
ανιχνεύσιµου ποσοστού αίγειου γάλακτος κατά 17% ενώ η θέρµανση στους 80°C για 15
sec προκάλεσε µείωση κατά 11%.
Από τον προσδιορισµό της σύνθεσης των λιπαρών οξέων στα µίγµατα πρόβειουαίγειου
παρατηρήθηκε διαφοροποίηση στον C18. Περισσότερες διαφοροποιήσεις
παρατηρήθηκαν στα µίγµατα αγελαδινού-αίγειου, συγκεκριµένα στα C8, C10, C16, στα
µικρής και µεσαίας αλύσου λιπαρά οξέα (C4-C16) όπως και στο κλάσµα C12:C10 και
τέλος στα µίγµατα αγελαδινού-πρόβειου παρατηρήθηκε διαφοροποίηση στα C8, C10,
C16, στα µεσαίας αλύσου λιπαρά οξέα (C12-C16) όπως και στο κλάσµα C12:C10.
The purpose of this study was the development and use of an ELISA
immunoassay method to accurately detect the type of milk used to manufacture dairy
products. For this purpose, antibodies were produced against goat immunoglobulin IgG
and became control of titer antibodies by using indirect ELISA. Goat IgG antibodies were
received after purification by affinity chromatography. For the development of the
immunoassay method were used the above produced antibodies.
The method was applied to mixtures of known quantity of goat milk in sheep milk
(5-100%). Also, was researched the effect of heat treatment on the effectiveness of the
method. Additionaly, was determined the composition of mixtures of fatty acids in sheepgoat
milk
to
detect
fraud
based
on
the
modulation
rate
of
fatty
acids,
but
also
of
mixtures
of
cows-goats
milk
and
cows-sheep
milk.
The
results of the immunoassay method showed that there was a high correlation
coefficient (r = 0.93) between real and detectable rate of goat milk. The method showed
high precision with coefficient of variation, 3.96%. The method can be applied equally
effectively to 65º C for 5 min, while the thermal treatment of 90º C for 5min affected the
effectiveness of the method. The heating of milk at 68º C for 10 min caused a reduction in
detectable percentage of goat's milk by 17% while the heating at 80° C for 15 sec caused
a decrease of 11%.
By determining the composition of mixtures of fatty acids in sheep-goat milk,
differentiation observed only in C18. More differences were observed in mixtures of
cows-goats milk, particularly in the C8, C10, C16, small and medium-chain fatty acids
(C4-C16) as the fraction of C12: C10 and finally in mixtures of cow-sheep milk, variation
was observed in C8, C10, C16, the medium-chain fatty acids (C12-C16) as the fraction of
C12: C10.
