Αξιολόγηση και εφαρμογή μοριακών μεθόδων για τη διάκριση στελεχών μη-Σακχαρομυκήτων από ζυμούμενα γλεύκη

Abstract

Στόχος της παρούσας εργασίας ήταν να διαχωριστούν στελέχη δέκα ειδών non-Saccharomyces ζυμών οι οποίες λαμβάνουν μέρος στην ζύμωση του μούστου. Οι ζύμες που μελετήθηκαν απομονώθηκαν από το τέλος της ζύμωσης από δείγματα σταφυλιών προερχόμενα από δύο ευρύτερες οινοποιητικές περιοχές Νεμέα, Πελοπόννησος και Πεζά, Κρήτη. Οι μέθοδοι που χρησιμοποιήθηκαν για να πετύχουμε διαχωρισμό μεταξύ των στελεχών ήταν οι RAPD-PCR και η Tandem Repeat tRNA-PCR. Καταφέραμε να δείξουμε έναν σημαντικό διαχωρισμό στο επίπεδο στελέχους για τα είδη Issathenckia orientalis και Hanseniaspora uvarum με την χρήση RAPD-PCR, καθώς και να συνδέσουμε συγκεκριμένους γονοτύπους με την γεωγραφική τους προέλευση για τα στελέχη των ειδών Lachancea thermotolerans και Metschnikowia pulcherimma με χρήση της μεθόδου Tandem Repeat tRNA-PCR. Συγκεκριμένα, δείξαμε για το L.thermotolerans ότι η γενετική απόσταση μεταξύ των πληθυσμών των αμπελώνων εντός κάθε οινοποιητικής περιοχής συσχετίζεται με την γεωγραφική απόσταση μεταξύ των αμπελώνων. Σαν συμπέρασμα, υπάρχουν ενδείξεις για σύνδεση συγκεκριμένων στελεχών του είδους L.thermotolerans με συγκεκριμένες γεωγραφικές υποπεριοχές, αν και απαιτούνται επαναληπτικές αναλύσεις από άλλες χρονιές. Τέλος έχουμε κάποια στοιχεία ότι ίσως οι υψομετρικές διαφορές να συσχετίζονται με γενετικές αποστάσεις.

Evaluation and implementation of molecular methods for discrimination of non-Saccharomyces strains isolated from grape must. The aim of the present study was to assort different strains of ten non-Saccharomyces yeast species that take part in must fermentation. The methods employed for achieving a high level of discrimination among yeast strains, were RAPD-PCR and Tandem Repeat tRNA-PCR. We used yeasts isolated from the end of must fermentation process from two Greek wine producing regions Nemea, Peloponissos and Peza, Crete. We managed to show not only that use of RAPD-PCR results in a high amount of polymorphisms for species Issathenckia orientalis and Hanseniaspora uvarum but also to link specific genotypes with geographical origin for species Lachancea thermotolerans and Metschnikowia pulcherimma, by use of Tandem Repeat tRNA-PCR for these latter species. Specifically, we showed that geographical distance within a certain region (Peza or Nemea) correlates with genetic distance among strain populations of vineyards for L. thermotolerans. As a result, there are indications for association of specific strains of L. thermotolerans to specific “terroirs” although we need to perform extra analyses from more seasons of cultivation. Finally we have some clues that maybe altitude also correlates with genetic distance.