Επίδραση της προσαρμογής σε συνθήκες όξινης και θερμοκρασιακής καταπόνησης στην οξεοανθεκτικότητα και το πρωτέωμα του παθογόνου Listeria monocytogenes Scott A

Abstract

Σκοπός αυτής της μελέτης είναι ο προσδιορισμός του πρωτεϊνικού περιεχομένου κυττάρων του παθογόνου μικροοργανισμού Listeria monocytogenes Scott A, τα οποία έχουν υποστεί διαφορετικού είδους προσαρμογή (όξινη και θερμοκρασιακή). Παράλληλα, αντικείμενο της παρούσας εργασίας αποτελεί η διερεύνηση της επίδρασης των προαναφερόμενων συνθηκών προσαρμογής στη φυσιολογία των εν λόγω κυττάρων του μικροοργανισμού, σε συνθήκες ισχυρά όξινης καταπόνησης. Για τον προσδιορισμό του πρωτεϊνικού περιεχομένου κυττάρων του μικροοργανισμού Listeria monocytogenes Scott A, γίνεται αρχικά απομόνωση των πρωτεϊνών από τις κυτταρικές καλλιέργειες του μικροοργανισμού, ενώ στη συνέχεια ακολουθεί η ηλεκτροφόρηση δύο διαστάσεων (2-D electrophoresis), η οποία τελικά οδηγεί στην αποτύπωση της πρωτεϊνικής σύστασης του μικροοργανισμού πάνω σε πηκτή, υπό μορφή πρωτεϊνικού «χάρτη», για τις διαφορετικές συνθήκες προσαρμογής. Όσον αφορά τη διερεύνηση της επίδρασης των προηγούμενων συνθηκών στη φυσιολογία των κυττάρων του συγκεκριμένου στελέχους, πραγματοποιείται έκθεση του μικροοργανισμού σε χαμηλές τιμές pH (3.0, 3.5, 4.0) με ταυτόχρονο προσδιορισμό της ανθεκτικότητάς του. Κάτι τέτοιο επιτυγχάνεται με τη βοήθεια της κλασικής μέτρησης/ προσδιορισμού του μικροοργανισμού με χρήση τρυβλίων, τεχνική που οδηγεί σε κάθε περίπτωση στη δημιουργία των αντίστοιχων καμπύλων θανάτωσης, μέσω της σύγκρισης των κινητικών παραμέτρων των οποίων μπορούν να εξαχθούν χρήσιμα συμπεράσματα.

The purpose of this study is the determination of the protein composition of the foodborne pathogen Listeria monocytogenes Scott A, after acid and temperature adaptation, respectively. Furthermore, the study focuses on the effect that the previous conditions seem to have on the physiology of this particular strain, under acid stress conditions. In every case, for the determination of the protein composition of Listeria monocytogenes Scott A, protein isolation is performed at first, which is then followed by two-dimensional electrophoresis, resulting finally in the fixing of the cell proteins onto a polyacrylamide gel. Regarding the effect on physiology, cells of the above strain are exposed on low pH values (3.0, 3.5, 4.0) and their resistance is assessed through the use of the plate count method, which leads on modelling resistance of the strain for every single case. Comparison between the kinetic parameters of the models can lead to useful conclusions.