Απομόνωση και μελέτη βιοδραστικών συστατικών αρωματικών φυτών

Abstract

Το δενδρολίβανο (Rosmarinus officinalis) είναι ένα από τα αρωµατικά φυτά του ελλαδικού χώρου που περιέχει φαινολικά διτερπένια ( καρνοσικό οξύ, καρνοσόλη), φλαβόνες καθώς και αυξηµένες ποσότητες ροσµαρινικού οξέος. Πρόσφατες έρευνες έδειξαν ότι το ροσµαρινικό οξύ αναστέλλει την φωσφολιπάση A από το δηλητήριο του φιδιού Bothrops jararacussu. Σκοπός της παρούσας µελέτης ήταν α) η αποµόνωση ροσµαρινικού οξέος από δενδρολίβανο καθώς και β) η µελέτη της αλληλεπίδρασης φαινολικών οξέων και τερπενίων µε την εκκριτική φωσφολιπάση A 2 2 (GIIA sPLA ). Για τον σκοπό αυτό συλλέχθηκε δενδρολίβανο από την Άνδρο και αφού ξηράνθηκε µελετήθηκε η αποµόνωση του ροσµαρινικού οξέος µε εκχύλιση µε CH 3 OH:H 2 2 O και µε εκχύλιση µε H O, όπου και καταλήξαµε στο συµπέρασµα ότι η εκχύλιση µε CH 3 OH:H 2 2 O είναι αποτελεσµατικότερη στην αποµόνωση του ροσµαρινικού οξέος από την εκχύλιση µε H O. Στα δείγµατα προσδιορίστηκε η παρουσία του παραγώγου του ροσµαρινικού οξέος µε τη βοήθεια της φασµατοσκοπίας 2 1 H-NMR. Επειδή στη βιβλιογραφία αναφέρεται ότι το ροσµαρινικό οξύ παρουσιάζει αντιφλεγµονώδη δράση επιλέξαµε να µελετήσουµε την αλληλεπίδραση του µε την GIIA sPLA . Για να κατανοήσουµε καλύτερα το µηχανισµό αλληλεπίδρασης µελετήσαµε επίσης το καφεϊκό οξύ που αποτελεί πρόδροµη ένωση του ροσµαρινικού οξέος, όπως επίσης και το φερουλικό οξύ που είναι ένα µεθυλιωµένο παράγωγο του καφεϊκού οξέος. Το ροσµαρινικό οξύ έχει ένα στερεογονικό κέντρο και µελετήσαµε τόσο το (S) όσο και το (R) εναντιοµερές του. Από τα αποτελέσµατα προέκυψαν τα εξής συµπεράσµατα: το φερουλικό οξύ έχει παρόµοια δοµή µε το καφεϊκό οξύ και φαίνεται ότι αλληλεπιδρούν παρόµοια στο ενεργό κέντρο του ενζύµου και έχουν πολύ κοντινό GOLDscore Fitness. Επιπλέον παρατηρούµε µια διαφορά στο GOLDScore Fitness µεταξύ (R)-ροσµαρινικού οξέος και (S)-ροσµαρινικού οξέος µε ελαφρά καλύτερο GOLDScore Fitness για το (S)-ροσµαρινικό οξύ. Επίσης επειδή στην πρόσφατη βιβλιογραφία αναφέρεται ότι το ολεανολικό οξύ αναστέλλει την sPLA και παρουσιάζει αντιφλεγµονώδη δράση µας ώθησε να το συµπεριλάβουµε στη µελέτη µας αλλά µας έδωσε πολύ µικρό GOLDScore Fitness, που δείχνει ότι η αντιφλεγµονώδης δράση του πιθανό δεν στηρίζεται στην αναστολή της φωσφολιπάσης GIIA sPLA2

A large number of polyphenolic compounds with antioxidant activity have been identified in Rosmarinus officinalis. The most abundant polyphenol compounds in rosemary plants are phenolic diterpenes (carnosic acid, carnosol), flavones and rosmarinic acid. In recent studies, rosmarinic acid inhibits GIIA sPLA from the venom of snake Bothrops jararacussu.

The aims of this study were as follows: to isolate rosmarinic acid from Rosmarinus officinalis and to study the interactions of phenolic acids ((R)-rosmarinic acid, (S)rosmarinic

acid, ferulic acid and caffeic acid) and terpenes (oleanolic acid) with the phopsholipase A 2 (GIIA sPLA ). To this reason, rosemary leaves were collected from Andros, dried and groud for extraction analysis with CH 3 OH:H 2 2 O and H 2 O. The results clearly suggest that CH 3 v 2 OH:H O extraction is better than H 2 O extraction and rosmarinic acid fraction was identified by the help of HNMR

spectroscopy. Furthermore, ferulic and caffeic acid have similar interactions with the ), (S)-rosmarinic acid has the higher GOLDScore Fitness and oleanolic has the worst score which shows us that its inflammatory action is possibly not related to the (GIIA sPLA GIIA sPLA 2 2 inhibition