Η φύση είναι μια ανεξάντλητη πηγή χημικών μορίων με σημαντικές βιολογικές ιδιότητες, ποικιλία και πρωτοτυπία σε δομικά χαρακτηριστικά που είναι δύσκολο αν όχι αδύνατο να προσεγγιστούν από οποιοδήποτε συνθετικής χημείας εργαστήριο. Το γεγονός αυτό καθιστά τα φυσικά προϊόντα εξαιρετικά ενδιαφέροντα από ερευνητικής σκοπιάς για την ανάπτυξη νέων φαρμακευτικών και εν γένει βιοδραστικών προϊόντων.
Η παρούσα μεταπτυχιακή εργασία αποτελεί ένα πολύ μικρό βήμα προς την κατεύθυνση αυτή. Αντικείμενο της αποτέλεσε ο έλεγχος έξι (6) επιμέρους κλασμάτων φυσικών εκχυλισμάτων, τα οποία έχουν απομονωθεί από το φυτό Ασημοσορβιά (Sorbus umbellate) της ελληνικής χλωρίδας. Στην εργασία αυτή, παρουσιάζονται τα αποτελέσματα αυτού του ελέγχου σε in vivo πειράματα στο zebrafish (Danio rerio). Το σύστημα αυτό, λόγω των πολλών πλεονεκτημάτων που προσφέρει, αποτελεί ένα αναπτυξιακό μοντέλο που χρησιμοποιείται ευρέως στην έρευνα τα τελευταία χρόνια. Οι υπό μελέτη ουσίες δηλαδή το εκχύλισμα (ΤΕ) και τα κλάσματα του (F4, F5,F6,F7,F8,F9) προστέθηκαν σε έμβρυα zebrafish και στη συνέχεια, ελέγχθηκε στις 96 ώρες η τοξικότητα τους για κάθε συγκέντρωση τους εκφρασμένη σε mg ουσίας ανά 1 ml υδατικού διαλύματος. Αφού υπολογίστηκε η τοξικότητά τους με μέτρηση της συγκέντρωσης στην οποία πεθαίνει το 50% (LC50) των πειραματοζώων, επιλέχθηκαν τρία κλάσματα ώστε να μελετηθεί η επίδραση τους στο ήπαρ και η ικανότητά τους να επάγουν ή να αναστέλλουν την αγγειογένεση στο μοντέλο-οργανισμό zebrafish.
Τα δεδομένα της θνησιμότητας των εμβρύων αναλύθηκαν με την ανάλυση Probit.
Από την ανάλυση των αποτελεσμάτων έγινε σαφές ότι το χόριο είναι πολύτιμο για την προστασία των εμβρύων δεδομένου ότι οι τιμές LC50 & LC95 ήταν πολύ μικρότερες στα έμβρυα των 24hpf στα οποία είχε αφαιρεθεί το χόριο σε σχέση με τις τιμές των LC50 & LC95 στα έμβρυα 3hpf στα οποία δεν είχε αφαιρεθεί το χόριο.
Με βάση τα αποτελέσματα συμπεραίνουμε ότι το κλάσμα F6 είχε σε έμβρυα 3hpf τις μεγαλύτερες LC50 & LC95 από τα υπόλοιπα πέντε κλάσματα και το αρχικό εκχύλισμα. Για το λόγο αυτό χρησιμοποιήθηκε για το δεύτερο στόχο της μεταπτυχιακής αυτής εργασίας, τη διερεύνηση δηλαδή των επιπτώσεων του στο ήπαρ και στην αγγειογένεση, αλλά δεν υπήρχε αρκετό υλικό για επεξεργασία. Επίσης, επιλέξαμε εκτός από το αρχικό εκχύλισμα να μελετήσουμε τα κλάσματα F5, F6, F7 & F9.
Nature is an unlimited source of biomolecules with important biological properties and unique structural features. These molecules are extremely difficult to be synthesized ex vivo. Owing to the biological impacts and effects, natural products are extremely interesting since they posses bioactive properties and could be developed as new medicinal drugs. The main objective was to test seven (7) sub-fractions of natural extracts on the liver and angiogenesis. The extracts were isolated from the plant Asimosorvia (Sorbus umbellate) of Greek flora. In this study, we present the results of the in vivo testing experiments on zebrafish (Danio rerio). Due to the plethora of its advantages, zebrafish has emerged as a high-throughput but low-cost model organism and is widely used in research in recent years. The chemical molecules were added to zebrafish embryos and then tested for toxicity effects at 96 hours post fertilization. The toxicity of the molecules was assessed by measuring the concentration at which 50% of experimental animals died (LC50). Three fractions were selected to study their effect on the liver and their ability to induce or inhibit angiogenesis on zebrafish. The data from this study showed that the chorion that surrounds zebrafish embryos protects them from exposure to chemical compounds. LC50 & LC95 were much lowest in embryos of 24 hpf that have been dechorionated, compared to the values of LC50 and LC95 in 3 hpf embryos, in which the chorion has not been removed. The were collected by using Probit analysis. Based on the results of this study, we conclude that the F6 molecule showed the lowest values of LC50 and LC95 compared to the other five aliquots and the original extract. However, more work is needed to conclude any toxicity effects on liver and angiogenesis.
