Διερεύνηση της περιοδικότητας της αποβολής του Mycobacterium Anium Subspecies Paratuberculosis σε πρόβατα με φυσική έκθεση στην παραφυματίωση

Abstract

Στο πλαίσιο διερεύνησης με σκοπό τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας του ελέγχου και της απομάκρυνσης ζώων ως μέτρου αντιμετώπισης της παραφυματίωσης, διενεργήσαμε μία προκαταρκτική μελέτη χρησιμοποιώντας ELISA και real time PCR για να εκτιμήσουμε εάν η θετικότητα των προβάτων στην παραφυματίωση κυμαίνεται μεταξύ συγκεκριμένων σταδίων αναπαραγωγής, σε πληθυσμό ζώων με υποκλινική παραφυματίωση. Στο προκαταρκτικό στάδιο της ανάλυσης, δείγματα κοπράνων και αίματος συλλέχθηκαν από 42 ενήλικα θηλυκά ζώα, πριν (ΡΡ1) και μετά τον τοκετό (ΡΡ2), και πριν από την περίοδο οχείας. Μόνο ένα από τα ζώα αυτά αντέδρασε θετικά στην ELISA (2.38%, 1 στα 42), που αντιστοιχεί στο 2.8% των θετικών στην PCR ζώων (1 από 36). Ως εκ τούτου, το τελικό στάδιο της έρευνας διεξήχθη χρησιμοποιώντας μόνο real time PCR, η οποία εφαρμόστηκε σε δείγματα κοπράνων που συλλέχθηκαν από 85 ζώα σε 5 περιόδους δειγματοληψίας: 4-15 / 1-3 ημέρες (FP1 / FP2) πριν και μετά τον τοκετό (FP3 / FP4) και πριν από την περίοδο οχείας (FP5). Το αποτέλεσμα της προκαταρκτικής ανάλυσης έδειξε ότι η θετικότητα της PCR, τόσο ως προς τον αριθμό των προβάτων όσο και ως προς την ποσότητα του ΜΑΡ, είναι στατιστικά σημαντικά χαμηλότερη πριν από τον τοκετό (PP1), ενώ αντίστοιχα της τελικής μελέτης, υψηλότερη στην FP4 σε σύγκριση με την FP5. Σημαντικά υψηλότερα επίπεδα θετικότητας στην PP2 και FP4 καταγράφηκαν επίσης σε σχέση με ζώα που αντέδρασαν θετικά στην PCR περισσότερες από μία φορά. Συμπερασματικά, στα πρόβατα με υποκλινική παραφυματίωση, η περίοδος 4-15 ημερών μετά τον τοκετό είναι πιο κατάλληλη για την εφαρμογή μέτρων ελέγχου και απομάκρυνσης με στόχο την αντιμετώπιση της νόσου, χρησιμοποιώντας real time PCR. Η χρήση της ELISA για τον ίδιο σκοπό δεν ενδείκνυται σε σχέση με τη συγκεκριμένη κατηγορία ζώων, λόγω της χαμηλής ευαισθησίας της μεθόδου.

Within the context of an investigation focused at improving the effectiveness of test-and-removal for the control of ovine paratuberculosis, we recently conducted a preliminary study using ELISA and real time PCR to assess whether parturition affects test-positivity, in animals with subclinical paratuberculosis. Samples of faeces and blood were collected from 42 adult female animals, before (PP1) and after parturition (PP2), and before mating. In the preliminary stage of the analysis, only one of the tested animals, reacted positively to ELISA (2.38%, 1 of 42), which corresponds to 2.8% of PCR-reactors (1 of 36). Therefore, the final stage the investigation was conducted using only real time PCR, which was applied to test samples of faeces collected from 85 animals, in 5 periods of sampling: 4-15/1-3 days (FP1/FP2) before and after parturition (FP3/FP4), and before mating (FP5). The result of the preliminary analysis indicated that PCR-positivity in terms of the number of shedders and the amount of MAP, is statistically significantly lower before parturition (PP1), whereas that of the final, higher in FP4 compared to FP5. Significantly higher levels of positivity in PP2 and FP4 were also recorded in connection with animals reacting positively to PCR more than once. In conclusion, in sheep with subclinical paratuberculosis, the period of 4-15 days postpartum is more suitable for the application of test-and-removal aiming to the control of the disease, using real time PCR. The use of ELISA for the same purpose is not recommended in the specific category of animals, due to low sensitivity.